Ayẹwo Hemoglobin Electrophoresis

Ilana idanwo

Hemoglobin electrophoresis ṣe ifọkansi lati ṣawari ati jẹrisi ọpọlọpọ awọn haemoglobin deede ati ajeji.

Nitori awọn idiyele oriṣiriṣi ati awọn aaye isoelectric ti awọn oriṣi hemoglobin ti o yatọ, ni ojutu ifipamọ pH kan, nigbati aaye isoelectric ti haemoglobin dinku ju pH ti ojutu ifipamọ, haemoglobin gbe idiyele odi ati ki o lọ si ọna anode lakoko electrophoresis. Ni idakeji, haemoglobin pẹlu idiyele rere n lọ si ọna cathode.

Labẹ foliteji kan ati lẹhin akoko elekitirophoresis kan pato, awọn hemoglobins pẹlu awọn idiyele oriṣiriṣi ati awọn iwuwo molikula ṣe afihan awọn itọsọna iṣiwa oriṣiriṣi ati awọn iyara. Eyi ngbanilaaye fun ipinya ti awọn agbegbe ọtọtọ, ati pe atẹle awọ-awọ tabi itupalẹ wiwa elekitirophoretic le ṣee ṣe lori awọn agbegbe wọnyi lati ṣe iwọn awọn oriṣiriṣi haemoglobins. Ọna ti a lo julọ julọ jẹ pH 8.6 cellulose acetate membrane electrophoresis.

Laarin cytoplasm, awọn ẹgbẹ ethylene glycol (CHOH-CHOH) ti o wa ninu glycogen tabi awọn ohun elo polysaccharide (gẹgẹbi awọn mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, bbl) ti wa ni oxidized nipasẹ igbakọọkan acid ati iyipada si awọn ẹgbẹ aldehyde (CHO-CHO). Awọn ẹgbẹ aldehyde wọnyi darapọ pẹlu Schiff reagent purplish-pupa ti ko ni awọ, ti o ṣe awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ-awọ ti o wa ni ibi ti awọn polysaccharides wa ninu sẹẹli. Ihuwasi yii ni a mọ bi idoti igbakọọkan acid-Schiff (PAS), ti a tọka si tẹlẹ bi abawọn glycogen.

Ọna idanwo

Awọn ohun elo:Cellulose acetatemembrane, ohun elo electrophoresis(DYCP-38C ati ipese agbara DYY-6C), Ohun elo ikojọpọ Apeere ti o ga julọ(pipette), spectrophotometer, colorimetric cuvettes, buffers.

Ifipamọ:

(1) pH 8.6 TEB Buffer: Ṣe iwọn 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g boric acid, ati fi omi distilled si 1000 milimita.

(2) Borate Buffer: Ṣe iwọn 6.87 g borax ati 5.56 g boric acid, ki o si fi omi distilled si 1000 milimita.

Ilana:

Patunṣe ti Haemoglobin Solusan

Mu 3 milimita ti ẹjẹ ti o ni heparin tabi iṣuu soda citrate bi anticoagulant. Centrifuge ni 2000 rpm fun awọn iṣẹju 10 ki o sọ pilasima naa silẹ. Fọ awọn sẹẹli ẹjẹ pupa ni igba mẹta pẹlu iyọ ti ẹkọ iṣe-ara (750 rpm, iṣẹju 5 centrifugation ni igba kọọkan). Centrifuge ni 2200 rpm fun awọn iṣẹju 10 ki o si sọ ohun ti o ga julọ silẹ. Ṣafikun iye dogba ti omi distilled, lẹhinna ṣafikun awọn akoko 0.5 iwọn didun tetrachloride erogba. Gbọn ni agbara fun iṣẹju 5, lẹhinna centrifuge ni 2200 rpm fun iṣẹju mẹwa 10 lati gba ojutu Hb oke fun lilo nigbamii.

Ríiẹ Membrane

Ge awọ ara cellulose acetate sinu awọn ila ti o ni iwọn 3 cm × 8 cm. Rẹ wọn ni pH 8.6 TEB saarin titi ti o kun ni kikun, lẹhinna yọ kuro ki o si gbẹ pẹlu iwe àlẹmọ.

Aami

Lo pipette kan lati ṣe iranran 10 μl ti ojutu haemoglobin ni inaro sori awọ awọ acetate cellulose (ẹgbẹ ti o ni inira), nipa 1.5 cm lati eti.

Electrophoresis

Tú ojutu buffer borate sinu iyẹwu electrophoresis. Gbe awo sẹẹli acetate cellulose pẹlu ẹgbẹ ti o rii ni opin cathode ti iyẹwu naa. Ṣiṣe ni 200 V fun ọgbọn išẹju 30.

Elution

Ge awọn agbegbe HbA ati HbA2, gbe wọn sinu awọn ọpọn idanwo lọtọ, ki o si fi milimita 15 ati 3 milimita ti omi distilled, lẹsẹsẹ. rọra gbọn lati yọ haemoglobin kuro patapata, lẹhinna dapọ.

Awọ-awọ

Odo ifasilẹ ni lilo omi ti a ti sọ distilled fun ojutu elution ati wiwọn gbigba ni 415 nm.

Iṣiro

HbA2(%) = Gbigba tube HbA2 / (Imu ti tube HbA2 × 5 + Gbigba tube HbA2) × 100%

Iṣiro Awọn esi esiperimenta

Iwọn itọkasi fun pH 8.6 TEB Buffer Cellulose Acetate Electrophoresis: HbA> 95%, HbA2 1%-3.1%

Awọn akọsilẹ

Akoko Electrophoresis ko yẹ ki o gun ju. Membrane acetate cellulose ko yẹ ki o gbẹ nigba electrophoresis. Duro electrophoresis nigbati HbA ati HbA2 ti yapa ni kedere. Electrophoresis gigun le fa itanka ẹgbẹ ati yiya.

Yẹra fun lilo apẹẹrẹ pupọ. Omi haemoglobin ti o pọju le ja si iyọkuro ẹgbẹ tabi aisun abawọn ti ko to, ti o fa awọn ipele HbA ti o ga soke eke.

Ṣe idiwọ ibajẹ ti awọ ara acetate cellulose pẹlu awọn ọlọjẹ.

Awọn lọwọlọwọ ko yẹ ki o ga ju; bi bẹẹkọ, awọn ẹgbẹ haemoglobin le ma yapa.

Nigbagbogbo pẹlu awọn apẹẹrẹ lati awọn eniyan deede ati awọn haemoglobin ajeji ti a mọ pataki bi awọn idari.

Beijing Liuyi Biotechnology ṣe iṣelọpọ ojò electrophoresis ọjọgbọn fun hemoglobin electrophoresis ti o jẹ awoṣeDYCP-38Ccellulose acetate awo electrophoresis tanki, ati pe awọn awoṣe meji wa ti ipese agbara electrophoresis ti o wa fun ojò elekitirophoresis cellulose acetate membraneDAY-2CatiDAY-6Cibi ti ina elekitiriki ti nwa.

Nibayi, Beijing Liuyi Biotechnology pese cellulose acetate awo fun awọn onibara, ati awọn iwọn ti cellulose acetate awo le ti wa ni adani. Kaabo lati beere wa fun awọn ayẹwo ati alaye siwaju sii.

brand Beijing Liuyi ni diẹ sii ju 50-ọdun itan ni China ati awọn ile-le pese idurosinsin ati ki o ga-didara awọn ọja gbogbo ni ayika agbaye. Nipasẹ awọn ọdun ti idagbasoke, o yẹ fun yiyan rẹ!

A n wa awọn alabaṣepọ ni bayi, mejeeji OEM electrophoresis ojò ati awọn olupin ti wa ni tewogba.

Ti o ba ni ero rira eyikeyi fun awọn ọja wa, jọwọ ma ṣe ṣiyemeji lati kan si wa. O le fi ifiranṣẹ ranṣẹ si wa ni imeeli[imeeli & # 160;tabi[imeeli & # 160;, tabi jọwọ pe wa ni +86 15810650221 tabi ṣafikun Whatsapp +86 15810650221, tabi Wechat: 15810650221